Изучение микромира под микроскопом/§2

Материал из Викиверситета
Перейти к навигации Перейти к поиску
Эта статья — часть материалов: курса Изучение микромира под микроскопом

Приготовление препарата[править]

Высушивание и фиксирование препарата[править]

Для приготовления демонстративного препарата на середину чистого предметного стекла наносят небольшую каплю воды и с помощью бактериальной петли помещают в нее исследуемый материал. Материал равномерно распределяют на стекле таким образом, чтобы образовался тонкий мазок круглой или овальной формы размером 1-2 см2. Затем препарат высушивают либо при комнатной температуре на воздухе, либо в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки.

При фиксации исследуемого материала он прикрепляется к стеклу, и возрастает восприимчивость микробов к окраске. После фиксации производят окраску мазка.

Фиксация нагреванием[править]

Наиболее простым и самым распространенным способом является фиксация жаром - нагреванием на пламени горелки: препарат несколько раз проводят через наиболее горячую часть пламени горелки.

Фиксация спиртом[править]

Лучшим фиксатором является метиловый спирт. В метиловом спирте мазки выдерживают не менее 5 мин, а в этиловом и денатурированном спирте и смеси Никифорова — не менее 30 мин.

Окраска микроорганизмов[править]

В естественном состоянии бактерии имеют такой же коэффициент преломления, как и стекло, поэтому они невидимы под микроскопом. Благодаря окраске можно изучать их морфологические особенности.

Простой способ[править]

При простой окраске, которая позволяет быстро изучить морфологические особенности микробов, обычно используют только один краситель, чаще всего красного цвета - фуксин (окраска производится в течение 1-2 мин) или синего цвета - метиленовый синий (время обработки мазка краской 3-5 мин).

Процедура: на высушенный препарат наливают краситель, затем смывают водой, высушивают.

Сложный способ[править]

Методика окраски по Граму заключается в последовательной обработке фиксированного мазка:

  1. окраске генцианвиолетом (краситель фиолетового цвета) через фильтровальную бумагу (1-2 мин)
  2. обработке раствором Люголя (1 мин)
  3. обесцвечивании спиртом (0,5-1 мин - до отхождения фиолетовых струек краски)
  4. промывании водой
  5. окрашивании фуксином (1-2 мин).

Сущность метода состоит в том, что грамположительные бактерии удерживают комплекс краситель - йод и не обесцвечиваются спиртом, грамотрицательные не обладают этим свойством, т. е. обесцвечиваются спиртом (дифференцирующим веществом) и докрашиваются фуксином. В результате грамположительные бактерии приобретают фиолетовый цвет, грамотрицательные - красный.